高二生物分离以尿素为氮源的微生物教案

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辅导教案
导学诱思DAOXUEYOUSI

一、以尿素为氮源的微生物ks5u
1．尿素：又称________，是________的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的________中都含有尿素，大量尿素的存在对环境造成污染。
2．以尿素为氮源的微生物：
这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有________，通过________尿素作为其生长的氮源。其利用尿素的方程为：
 
3．分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理：在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。
答案：1.脲　蛋白质降解　尿
2．脲酶　降解　
ks5u
二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验
1．实验目的：
(1)使用________的培养基(含有尿素)分离________的细菌(含有脲酶的细菌)。
(2)使用____________检知酶(脲酶)所催化的反应。
2．实验内容：
(1)从________中________能利用尿素的细菌。
(2)观察________。
3．实验步骤：
(1)采用倒平板技术，在超净台上的________旁制得固体平面________培养基与________培养基；
(2)制备细菌悬浮液：
将________1 g，在________条件下加到________mL无菌水的三角瓶中，振荡________min，制成________稀释液；从该稀释液中取________mL悬液加到________mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成________稀释液；再从该稀释液中取________mL悬液加到________mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成________稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6……土壤稀释液。
(3)用________法分离细菌：
取________mL稀释10－4和10－5的________，分别加到有________培养基和________培养基的培养皿中，再将保存在______中的玻璃刮刀放在________上灼烧，待________后，在______旁打开培养皿，将菌液涂布到________上。
(4)培养：将培养皿________，在________℃恒温箱中培养________h。
(5)观察、计数菌落。

培养基ks5u 细菌悬浮液稀释度0
 ________ ________
______固体培养基 
 

______固体培养基 
 

答案：1.(1)专一　专一　(2)指示剂颜色的变化
2．(1)土壤　分离出　(2)菌落数
3．(1)酒精灯　LB全营养　尿素　(2)土样　无菌　99　10　10－2　0.5　4.5　10－3　0.5　4.5　10－4　(3)涂布　0.1　土壤稀释液　LB　尿素　70%酒精　酒精灯火焰　刮刀上火焰熄灭　酒精灯火焰　整个平面　(4)倒置　37　24～48　(5)10－4　10－5　LB全营养　尿素

核心解读HEXINJIEDU

1．尿素在自然界中氮循环有怎样的关系？
自然界中的氮循环在保持生态稳态上有重要的作用，具体过程可参看下图。
 
自然界中的氮循环
如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下就会被水解，水解后的NH3会使土壤变成碱性，NH3与其他阴离子物质如SO2－4、CO2－3、NO－3等形成化合物，则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。
2．为什么本实验中要用琼脂糖来代替琼脂配制固体培养基呢？琼脂糖与琼脂有何区别？
琼脂在制作固体培养基时起凝固剂的作用。但它却是一种未被纯化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。在本实验中所使用的尿素培养基却要求提供氮元素的物质只有尿素，用这种培养基才能分离得到含脲酶的细菌。若用琼脂来制备本实验的尿素固体培养基，则提供氮元素的物质除了尿素还有琼脂，用这种培养基就不难只得到含脲酶的细菌，还会得到大量以非尿素为氮源的细菌，这样就达不到分离出以尿素为氮源的细菌这一实验目的了。所以要将琼脂纯化，去除那些含氮化合物，这样经纯化得到的琼脂糖就可以代替琼脂做固体剂且不会带来含氮化合物对本实验的干扰了。
3．本实验的微生物分离与上一实验中大肠杆菌的分离实质上一样吗？
两者的细菌分离有很大的不同。

实验名称 分离方法 分离的内容 分离结果
实验1：大肠杆菌培养和分离 划线分离法 从同种菌种中分离得到同种菌的单菌落 在划线的末端出现大肠杆菌单菌落
实验2：分离以尿素为氮源的微生物 涂布分离法 从土壤浸出液里所存在的各种细菌中只将含有脲酶的细菌分离出来 只出现含有脲酶的细菌菌落
4.如何区分已经从土壤中分离得到了有脲酶的细菌菌落？这样区分的原理是什么？
若在尿素培养基上出现了菌落，则表明已经分离得到有脲酶的细菌菌落了。得出这一结论的依据是：尿素培养基中提供氮源的只有尿素，在这样的培养基中能存活的细菌则能利用尿素做氮源，它们就是有脲酶的细菌。
5．全营养培养基与尿素培养基上的菌落在数量和类型上有什么不同呢？为什么出现这种差异呢？

 　    　　　　
　LB培养基稀释度10－4　   尿素培养基稀释度10－4
比较上图，可明显发现：全营养培养基数量和种类都明显多于尿素培养基上的。因为全营养培养基中的氮源是蛋白胨，很多细菌都能利用它，而尿素培养基中的氮源只有尿素，只有含脲酶的细菌才能利用尿素，能存活。
6．全营养培养基与尿素培养基属于什么类型的培养基呢？微生物的培养基是怎么分类的？
全营养培养基属于基础培养基，而尿素培养基属于选择培养基。
培养基名目繁多，种类各异，为了便于系统化，可对其进行分类。
(1)按对培养基成分的了解程度分：
①天然培养基：利用一些天然材料制成的培养基，对其成分无法确定。
具体材料：如用肉汤、芽汁等制成的。
用途：适合作实验室用的基本培养基及大生产中的种子培养基。
②组合培养基(合成培养基、化学限定培养基或综合培养基)：
是用化学成分及其数量都很清楚的物质配制的培养基。

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