牡蛎酶解液的抗氧化活性研究

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取50 mmol/L ，pH 8.20 Tris-HCl缓冲液4.5 ml(其中含有2 mmol/L EDTANa2)，加入0.1 ml不同浓度的样液，于25℃保温10 min，然后加入25℃预温的4.5 mmol/L的邻苯三酚（用10 mmol/L HCl配制）0.2 ml，混匀后迅速于干燥的比色皿中，在320 nm下每隔半分钟测定一次OD值，以等体10 mmol/L HCl代替邻苯三酚溶液为空白调零，对照组以等体积去离子水代替样品。作吸光度随时间变化曲线的回归方程，其斜率为邻苯三酚的自氧化速率V，按下式计算样品对O-2·的抑制率。

抑制率 (%) = ( V对照－ V样品)/ V对照×100%

式中：V对照-对照组邻苯三酚自氧化速率(△OD/min)；V样品-样品组邻苯三酚自氧化速率(△OD/min)。

2.6 牡蛎酶解液在Fe2+诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸（PUFA）过氧化体系中抗氧化活性(AOA)的测定［10，11］卵黄中磷脂C-2位上所含极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）过不饱和脂肪酸（PUFA）在铁离子的催化下，经振荡，能诱发过氧化，产生烷氧基（LO·）和烷过氧基（LOO·）物质，再引发链式反应。在加热的条件下，过氧化产物可与硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红色化合物，并在波长为532 nm处有强吸光度。当有抗氧化剂存在时，可清除过氧化产物，从而阻断链式反应的发生，使得该卵黄脂蛋白脂质过氧化体系的过氧化产物生成受阻，根据吸光度数值的变化可求出抗氧化剂的活性。

选用1∶25的卵黄悬液（卵黄用等体积的0.1 mol/L，pH 7.45的磷酸缓冲液PB配成1∶1悬液，磁力搅拌10 min，再用PB稀释成1∶25的悬液置于冰箱中备用）并吸取0.2 ml，加入不同浓度的牡蛎酶解液稀释液0.1 ml，加入25 mmol/L FeCl2 0.2 ml，用0.1 mol/L，pH 7.45的PB补充至2 ml，37℃培养12 h ，取出后加入0.5 ml 20%的三氯醋酸（TCA），静置10 min，以3500 r/min离心10 min，取2.0 ml上清液加入0.8%TBA（2-硫代巴比妥酸）1.0 ml，加塞，放入沸水浴中15 min，冷却后，于532 nm处比色测定吸光值（A），对照管除不加样品液外，其它试剂同前，所测吸光值为A0，空白管调零，空白管以2.0 ml PB代替，样品对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制率用AOA表示：AOA（%）=(A0－A) / A0×100%。

3 结果

3.1 牡蛎酶解液还原能力依据“2.2”还原能力的测定方法，在700 nm处的吸光度越大，样品的还原能力越强。由表1和图1可知，牡蛎酶解液在其浓度范围内随着浓度的增加而增大；与阳性对照—硫脲相比，其还原能力较弱。

而一般情况下，样品的还原能力与抗氧化能力呈正相关，所以牡蛎酶解液的抗氧化能力随其浓度的增加而增强。表1 牡蛎酶解液的还原能力

3.2 牡蛎酶解液在DPPH体系中抗氧化性依据“2.3” DPPH体系测定方法，(Ai－Aj)为样品组中单电子未被配对的DPPH·的吸光度值，该值越小，样品清除DPPH·的能力越强。由表2可知，牡蛎酶解液清除DPPH·的能力随浓度增大而增强。

牡蛎酶解液清除DPPH自由基的能力以EC50来衡量，EC50的定义为：使得DPPH自由基的清除率达到50％时需要的样品液的浓度，通过回归方程可求出EC50。依据回归方程Y= 6.42X + 3.048 7，r=0.993 7求得牡蛎酶解液清除DPPH·的EC50为7.313 mg/ml。表2 牡蛎酶解液对DPPH·的清除作用（

3.3 牡蛎酶解液在Fenton体系中抗氧化性依据Fenton体系反应原理，样品组在520 nm处测定的吸光度值越大，其清除·OH的能力越强，其在该体系中抗氧化能力越强。由表3可知，牡蛎酶解液和硫脲清除·OH的能力随它们的浓度增大而增强。

牡蛎酶解液和硫脲对·OH的清除作用的回归方程分别为Y = 29.261X + 11.078 ，r=0.975 0和Y = 7.826 9X + 13.725，r=0.990 2。 求得牡蛎酶解液和硫脲清除·OH的EC50分别为1.330 mg/ml和4.635 mg/ml，表明牡蛎酶解液对·OH有较强的清除作用，而且其清除·OH能力强于阳性对照药物硫脲。表3 牡蛎酶解液和硫脲对·OH的清除作用

3.4 牡蛎酶解液在邻苯三酚体系中抗氧化性依据“2.5”邻苯三酚自氧化体系的测定方法,在波长320 nm处测定的吸光度越小,样品的抗氧化能力越强。由图2可知,超氧阴离子自由基的产生和邻苯三酚产生有色物质的变化随着时间的变化而保持相对的稳定。不同浓度的牡蛎酶解液对邻苯三酚的自氧化均有一定的抑制作用，且随着牡蛎酶解液浓度的增加而增大，其抑制率分别为4.29 %，9.66%，13.95%，17.35%，19.86%。由此可知牡蛎酶解液在邻苯三酚体系中抗氧化性能力较弱，当样品为牡蛎酶解液母液时，抑制率仅达19.86%。

图2 牡蛎酶解液对超氧阴离子（O-2·）的抑制作用

3.5 牡蛎酶解液在Fe2+诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸（PUFA）过氧化体系中抗氧化活性由表4及图3可知牡蛎酶解液对PUFA过氧化体系的抑制作用随样品浓度的增大,抗氧化活性也明显增加。当样品为牡蛎酶解液母液时，抑制率AOA（%）值达到（82.97±0.25）%。

表4 牡蛎酶解液对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制作用(±s)

浓度C/mg·ml-1OD532抑制率（%）7.1201.159±0.00210.55±0.5510.6801.030±0.01820.53±0.7714.2400.647±0.00950.09±1.0817.8000.221±0.00282.97±0.25对照1.296±0.010

4 结论

牡蛎酶解液显示出了一定的还原能力，证明其具有一定的抗氧化活性。

牡蛎酶解液清除·OH的效果强于硫脲，其清除·OH的能力是硫脲的3.5倍；牡蛎酶解液在DPPH体系中也具有较强的清除DPPH自由基的能力。

图3 牡蛎酶解液对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制作用

在Fe2+诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸（PUFA）过氧化体系中有明显的抑制作用。

【参考文献】
［1］ 汪何雅，杨瑞金，王 璋，等.牡蛎的营养成分及蛋白质的酶法水解［J］.水产学报，2003，27（2）：163.

［2］ 谭雯文，周延华，梁海秋，等.牡蛎蛋白的纯化及酶解条件的研究［J］.现代食品科技，2006，22（2）：79.

［3］ 吴耀生，周素芳，赖祥进，等. 新编生物化学实验［M］.北京：人民卫生出版社，2002：37.

［4］ 刘 清，李 玉，姚惠源，等. 大麦提取物的体外抗氧化活性研究［J］.食品工业科技，2007，28（2）：131.

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